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免疫熒光實驗代測 檢測服務

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免疫熒光實驗代測
服務項目:包埋→切片→免疫熒光(單標)→免疫熒光(雙標)→抗體費用→全景掃描(單標)→全景掃描(雙標)→免疫熒光分析
樣本運輸:常溫運輸(4%多聚甲醛固定,可加冰袋運輸)
信帆生物提供各類實驗代測,更多服務項目歡迎致電咨詢,我們將竭誠為您服務!

免費咨詢:021-51870610

發郵件給我們:2409400669@qq.com

免疫熒光實驗代測

兔疫熒光技術是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。它是根據抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質和定位,以及利用定量技術(比如流式細胞儀)測定含量。

免疫熒光實驗說明:

1、確認要做的是單標還是雙標.

2、免疫熒光拍照免費。

3、免疫熒光要做預實驗。

4、全景掃描可看任意倍數。


冰凍切片熒光tunel+免疫熒光雙標實驗步驟

1、 冰凍切片固定冰凍切片從冰箱拿出來復溫,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮*干后于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

2、 修復:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

3、 破膜:切片稍甩干后在圈內滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

4、 加試劑1,2:按片子數量和組織大小取tunel試劑盒內適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)2:29混合(試劑1,2為現配現用),加到圈內覆蓋組織,切片平放于濕盒內,37℃恒溫孵育2小時,濕盒內加少量水保持濕度。

5、 BSA封閉:將玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min,在圈內滴加3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。

6、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。(濕盒內加少量水防止抗體蒸發)

7、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。

8、 DAPI復染細胞核:PBS(PH7.4洗滌3次,每次5min。去除PBS后在圈內滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。

9、封片:玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

10、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發波長330-380nm,發射波長420nm;FITC綠光激發波長465-495nm,發射波長515-555 nm;CY3紅光激發波長510-560,發射波長590nm

免疫熒光實驗代測

石蠟切片熒光tunel+免疫熒光雙標實驗步驟


1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15-20min-二甲苯15-20min-無水乙醇Ⅰ10min-無水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗(冬天脫蠟時間稍微延長)。

2、 修復:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

3、 破膜:切片稍甩干后在圈內滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

4、 加試劑1,2:按片子數量和組織大小取tunel試劑盒內適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)2:29混合,加到圈內覆蓋組織,切片平放于濕盒內,37℃恒溫箱孵育2小時,濕盒內加少量水保持濕度。

5、 BSA封閉:將玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min,在圈內滴加3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。

6、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。(濕盒內加少量水防止抗體蒸發)

7、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。

8、 DAPI復染細胞核:PBS(PH7.4洗滌3次,每次5min。去除PBS后在圈內滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。

9、封片:玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

10、鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發波長330-380nm,發射波長420nm;FITC綠光激發波長465-495nm,發射波長515-555 nm;CY3紅光激發波長510-560,發射波長590nm




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